鄭佩佩1962年加入南國實驗劇團訓練班，畢業後成為邵氏演員，3年後憑文藝片《情人石》參加亞洲影展，獲美國國際獨立製片人協會頒發「最具前途影星金武士獎」。鄭佩佩後來在胡金銓導演的《大醉俠》中飾演女俠，憑藉身手好而奠定武打女星地位。
鄭佩佩縱橫影壇數十年，曾演出超過100部影視作品，至今仍予觀眾深刻印象的有電影《臥虎藏龍》中的「碧眼狐狸」、劇集《楊門女將》系列的「佘太君」、電影《唐伯虎點秋香》中的「華夫人」等。她在《唐》片中「含笑半步釘」搞笑對白更成為經典。
除了「最具前途影星金武士獎」，鄭佩佩亦獲得過其他影視獎項。她在2000年演出電影《臥虎藏龍》，獲得香港電影金像獎「最佳女配角」殊榮；2018年，她獲第24屆華鼎獎頒發終身成就獎。2014年，鄭佩佩參與的英國電影《輕輕搖晃》在美國聖丹斯電影展首映，她獲提名第17屆英國獨立電影獎的「最佳女主角」。
2020年演出真人版電影《花木蘭》後，鄭佩佩便鮮有再現身。2021年，她的女兒原子鏸曾在社交網分享母親抱外孫的照片，當時的鄭佩佩滿頭白髮、顏容蒼老，腰上綁着固定帶。曾跟鄭佩佩合作的內地女星劉濤數月前亦表示鄭佩佩健康變差，需要別人攙扶。
